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Bon, Delphine. Evaluation de deux nouveaux outils pour l'étude d'échantillons biologiques par spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire: -La RMN HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning): une technique d'analyse d'échantillons bruts ; -La Métabonomique: une méthode d'analyse statistique des spectres pour la recherche de signatures métaboliques

Bon, Delphine (2007). Evaluation de deux nouveaux outils pour l'étude d'échantillons biologiques par spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire: -La RMN HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning): une technique d'analyse d'échantillons bruts ; -La Métabonomique: une méthode d'analyse statistique des spectres pour la recherche de signatures métaboliques.

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Résumé en francais

L'amélioration des outils analytiques est aujourd'hui indispensable pour la recherche de nouveaux marqueurs métaboliques, que ce soit pour l'aide au diagnostic de pathologies ou pour le suivi d'effets thérapeutiques. Lorsqu'on désire analyser des tissus par RMN liquide en haute résolution, il est nécessaire de réaliser une extraction tissulaire préalable. A l'opposé, la RMN HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning : RMN haute résolution par rotation de l'échantillon à l'angle magique) permet l'analyse directe des tissus biologiques, qu'ils soient d'origine animale ou végétale. La première partie de notre travail présente les différentes études que nous avons réalisées illustrant l'intérêt et les limites de cette nouvelle méthode. L'évaluation critique réalisée à partir d'un large éventail expérimental (animaux vivants (ver endogéique et larve de carabe), tissus rénal, cardiaque et musculaire frais et congelés) révèle ses inconvénients sur les plans logistique, sanitaire et analytique. La RMN HR-MAS permet l'observation simultanée des métabolites hydrosolubles et organosolubles mais leur quantification est souvent difficile. De plus, la rotation rapide du rotor (1-5 kHz) entraîne une altération des échantillons. L'avantage principal de la méthode réside dans sa capacité à analyser des échantillons de faible volume (12-92 µL) avec une excellente sensibilité. Notre étude nous a conduit à privilégier l'analyse RMN sur l'extrait plutôt que sur le tissu intact. La seconde partie concerne la métabonomique par RMN. L'étude métabonomique comparée de cellules de glioblastomes humains de phénotype radiorésistant ou radiosensible a permis de mettre en évidence des marqueurs caractéristiques de la radiorésistance. L'analyse en composantes principales (ACP) normée a été utilisée comme analyse statistique des données obtenues à partir de divers types d'échantillons ou de différentes méthodes d'analyse. Ainsi, les modifications métaboliques induites par l'obésité chez le rat ont été caractérisées en combinant les données RMN 1H des fractions hydrosolubles et organosolubles. De même, la caractérisation des phénotypes de différentes variétés de courge a été confortée en combinant les données obtenues à partir des spectres RMN 1H et 31P.

Sous la direction du :
Directeur de thèse
Desmoulin, Franck
Malet-Martino, Myriam
Ecole doctorale:Sciences de la matière (SdM)
laboratoire/Unité de recherche :Laboratoire de Synthèse et Physicochimie de Molécules d'Intérêt Biologique (SPCMIB), UMR 5068
Mots-clés libres :RMN 1H et 31P - HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning) - métabonomique - glioblastomes - obésité
Sujets :Sciences du vivant
Déposé le :11 Apr 2008 11:01