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Bellemer, Clément. Visualisation des étapes précoces de la biogénèse des microARN

Bellemer, Clément (2012) Visualisation des étapes précoces de la biogénèse des microARN.

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Résumé en francais

La maturation nucléaire des primary microARN (pri-miARN) catalysée par le complexe DGCR8-Drosha (Microprocesseur) est hautement régulée. Cependant peu de choses sont connues quant à l'organisation spatiale de la biogénèse des microARN dans le noyau des mammifères. Nous avons pu visualiser pour la première fois, dans des cellules vivantes et à l'échelle du noyau unique, le cheminement intra-nucléaire d'un pri-miARN exprimé de manière endogène et généré par le cluster de microARN du chromosome 19 (C19MC) depuis son site de transcription jusqu'aux molécules uniques de pri-miARN liées à DGCR8 dans le nucléoplasme. Nous avons pu montrer que le microprocesseur et dans un moindre cas les protéines RHA, ILF3, hnRNP C1/C2 et EWS se concentrent au niveau des pri-miARN non épissés du C19MC à proximité de leurs gènes. La combinaison d'expériences de Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP), Fluorescence Cross-Correlation Spectroscopy (FCCS) et de depletion par ARN interférence (RNAi), apporte des évidences d'un recrutement de DGCR8 et Drosha au niveau des pri-miARN du C19MC sous la forme d'un complexe préformé qui se dissocie séparément. Notre étude par une approche d'imagerie de cellules vivantes suggère que suite à l'interaction avec les pri-miARN et probablement de manière concomitante avec le clivage effectué par Drosha, le microprocesseur subit des changements conformationnels qui permettent le relargage de Drosha alors que DGCR8 reste lié de façon plus stable aux pri-miARN.

Sous la direction du :
Directeur de thèse
Cavaillé, Jérôme
Ecole doctorale:Biologie, santé, biotechnologies (BSB)
laboratoire/Unité de recherche :Laboratoire de Biologie Moléculaire Eucaryote (LBME), UMR 5099
Mots-clés libres :MicroARN - Placenta - Régulation post-transcriptionnelle de l'expression des gènes - Rétention des ARN - Mécanistique
Sujets :Sciences du vivant
Déposé le :22 Oct 2012 09:48