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Vincent, Bruno. Investigation fonctionnelle et structurale des mécanismes d'activation ou de régulation de RCPGs opiacés basée sur une approche par fragments

Vincent, Bruno (2008) Investigation fonctionnelle et structurale des mécanismes d'activation ou de régulation de RCPGs opiacés basée sur une approche par fragments.

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Résumé en francais

Les récepteurs aux opiacés (MOP, DOP, KOP, NOP) sont des Récepteurs Couplés aux Protéines G (RCPG) impliqués dans les processus d'analgésie, ainsi que dans les phénomènes de tolérance et dépendance. Les mécanismes moléculaires conduisant à l'activation des récepteurs ainsi qu'à leur régulation sont encore peu compris. Une approche par fragment a été utilisée pour contourner les difficultés techniques inhérentes à l'étude des protéines membranaires. La liaison de la boucle extracellulaire 2 (EC2) du récepteur NOP avec le ligand opioïde naturel du récepteur, la nociceptine (Noc), a été étudiée par mesure d'intensité de fluorescence et spectroscopie RMN. Les résultats précisent le rôle de la boucle EC2 dans la liaison de la nociceptine et indiquent une implication de la partie message opioïde. L'extrémité C-terminale du récepteur MOP (352-398) a été surexprimée dans E. Coli et purifiée. Cet outil nous a permis de réaliser des expériences de phosphorylations in vitro par les protéines kinases A et C (PKA et PKC respectivement) suivies d'une identification par spectrométrie de masse (MS). Cette approche biochimique directe démontre que la Ser363 et la Ser375 sont deux sites de phosphorylations chacun spécifique d'une des deux kinases. La recherche des partenaires protéiques de l'extrémité C-terminale du récepteur MOP a été effectuée. Les méthodes de protéomique employées sont discutées au vu des résultats. Finalement, la caractérisation structurale par RMN en solution de cette extrémité C-terminale a permis d'établir l'existence de deux domaines structurés en hélice a ouvrant des perspectives d'études d'interactions protéine-protéine.

Sous la direction du :
Directeur de thèse
Demange, Pascal
Mouledous, Lionel
Ecole doctorale:Biologie, santé, biotechnologies (BSB)
laboratoire/Unité de recherche :Ecole doctorale Biologie, Santé, Biotechnologies
Sujets :Sciences du vivant
Déposé le :21 Jul 2009 11:44