LogoLogo

Fallot, Stéphanie. Elaboration de vecteurs polycistroniques à stoechiométrie variable et application à la production d'anticorps recombinants

Fallot, Stéphanie (2009) Elaboration de vecteurs polycistroniques à stoechiométrie variable et application à la production d'anticorps recombinants.

[img]PDF - nécessite un logiciel de visualisation PDF comme GSview, Xpdf or Adobe Acrobat Reader
2759Kb

Résumé en francais

Les outils permettant de co-exprimer des protéines dans une cellule se sont fortement développés depuis plusieurs années. Divers systèmes ont été imaginés, allant de l'utilisation de plusieurs vecteurs indépendants à celle de vecteurs polycistroniques contenant des séquences particulières comme les IRES (sites d'entrée interne des ribosomes), mais aucun ne permet de moduler le ratio d'expression entre les protéines de façon simple, reproductible et étendue. Mon travail de thèse a consisté à développer un vecteur innovant permettant la co-expression de deux polypeptides dans des proportions réglables et applicable à l'expression d'anticorps recombinants. La production d'anticorps dans une cellule requiert l'expression simultanée de deux protéines, les chaînes lourdes et légères. Le ratio intracellulaire entre les deux chaînes a un fort impact sur la productivité d'anticorps. Le rapport optimum varie selon la séquence de l'anticorps, le type cellulaire utilisé, les conditions de production... Un nouveau type de vecteurs bicistroniques à stœchiométrie contrôlée a donc été conçu, facilement adaptable à la production du plus grand nombre d'anticorps dans des conditions variées. Ces vecteurs, basés sur l'épissage alternatif, permettent de moduler aisément le ratio entre les protéines en mutant les différents sites d'épissage insérés en amont de chacun des cistrons, ce qui en modifie la fréquence d'utilisation. Nous avons démontré que le ratio entre les deux protéines pouvait ainsi varier de 10:1 à 1:10. Les vecteurs ont été validés pour l'expression de plusieurs anticorps fonctionnels, dans différents types cellulaires et dans des conditions de transfection stable et transitoire.

Sous la direction du :
Directeur de thèse
Prats, Hervé
Mondon, Philippe
Ecole doctorale:Biologie, santé, biotechnologies (BSB)
laboratoire/Unité de recherche :Institut de Médecine Moléculaire de Rangueil (I2MR), INSERM U858
Mots-clés libres :Vecteurs polycistroniques - Epissage alternatif - Stoechiométrie modulable - Anticorps recombinants
Sujets :Sciences du vivant
Déposé le :19 Feb 2010 14:22