Chaisemartin, Laurent. Synthèses et utilisations de biotines bifonctionnelles pour le marquage de protéines

Résumé en francais

Les techniques de marquage de protéines constituent une étape clé dans l'étude de leur fonction, de leur localisation, et des interactions entre elles. Ainsi, durant ma thèse, deux techniques de marquage ont été développée : l'enzyme de biotinylation BirA et les intéines modifiées. Pour chaque méthode, une sonde de biotine bifonctionnelle, modifiée sur l'azote 1'N par une fluorescéine, a été synthétisée. Cependant, la biotine 1'N fluorescéine n'est pas substrat de BirA ou de son mutant BirA(Ser89Gly). Mais, l'utilisation d'intéines modifiées a permis de réaliser un marquage in vitro : un fragment d'anticorps scFv anti-RhoB qui a localisé, par fluorescence, RhoB endogène sur des cellules HeLa. Et aussi, avec cette même technique, un marquage in vivo a permis de confirmer l'existence du récepteur des oestrogènes alpha membranaire.